產品簡介：
BCA蛋白濃度測定試劑盒(BCA Protein Assay Kit)是最常用的蛋白濃度檢測方法。
原理：在堿性條件下蛋白質分子中肽鍵結構與Cu2+絡合并將 Cu2+ 還原成 Cu1+。BCA特異地與Cu1+結合形成穩定的藍紫色復合物，在562nm 處有最大的光吸收值并于蛋白質濃度成正比。該測定方法實現了蛋白濃度測定的簡單，高穩定性，高靈敏度和高兼容性。BCA 法測定蛋白濃度不受絕大部分樣品中的化學物質的影響，可以兼容樣品中高達5%SDS，5%Triton X-100，5%Tween 20,60,80。但受螯合劑和略高濃度的還原劑的影響，需確保EDTA低于10mM，無EGTA，二硫蘇糖醇低于1mM，β-巰基乙醇低于0.01%。
產品特點：
靈敏度高，檢測濃度下限達到25μg/ml，最小檢測蛋白量達到0.5μg，在50-2000 μg/ml 濃度范圍內有較好的線性關系，受樣品中離子與去污劑的影響小，可用酶標儀或分光光度計進行檢測。
使用方法：
1. 根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B (50:1) 配制適量BCA工作液，充分混勻。BCA工作液室溫24小時內穩定。
2. 完全溶解蛋白標準品，取10ul稀釋至100ul，使終濃度為0.5mg/ml。蛋白樣品在什么溶液中，標準品也宜用什么溶液稀釋。但是為了簡便起見，也可以用0.9%NaCl或PBS稀釋標準品。
3. 根據樣品數量，按50體積BCA試劑A加1體積BCA試劑B(50:1)配制適量BCA工作液，充分混勻。 例如5ml BCA試劑A加100μl BCA試劑B，混勻，配制成5.1ml BCA工作液。BCA工作液室溫24小時內穩定。
4. 將標準品按0, 1, 2, 4, 8, 12, 16, 20μl加到96孔板的標準品孔中，加用于稀釋標準品的溶液補足到20μl。
5. 加適當體積樣品到96孔板的樣品孔中，加用于稀釋標準品的溶液到20μl。
6. 各孔加入200μl BCA工作液，37℃放置30分鐘。注:也可以室溫放置2小時，或60℃放置30分鐘。BCA法測定蛋白濃度時，吸光度會隨著時間的延長不斷加深。并且顯色反應會因溫度升高而加快。如果濃度較低，適合在較高溫度孵育，或延長孵育時間。
7. 測定A562，540-595nm之間的波長也可接受。根據標準曲線計算出蛋白濃度。
包裝清單：
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組分列表： |
500T |
2500T |
5000T |
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BCA試劑A |
250ml*2 |
250ml*4 |
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BCA試劑B |
3ml |
15ml |
15ml*2 |
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蛋白標準(5mg/ml BSA) |
3ml |
15ml |
15ml*2 |
常見問題:
1. 測定標準曲線時發現隨著標準品濃度的增加吸光度或顏色沒有明顯變化。可能的原因是樣品中含有嚴重干擾BCA法測定蛋白濃度的物質。
2. 是否每次測定時都需要做標準曲線？建議每次測定時都做標準曲線。因為BCA法測定時顏色會隨著時間的延長不斷加深，并且顯色反應的速度和溫度有關，所以除非精確控制顯色反應的時間和溫度，否則如需精確測定宜每次都做標準曲線。
3. 試劑盒在低溫保存可能會出現沉淀，可以37℃孵育使其溶解。
注意事項：
1. 為了加快BCA 法測定蛋白濃度的速度可以適當用微波爐加熱，但是切勿過熱。
2. EDTA濃度必需小于10mM，不兼容EGTA。