快速濕式轉(zhuǎn)印槽Fast Wet Transfer Gel Tank
發(fā)布時間:2020-12-08 07:47:10 點擊:
Fast Wet Transfer Gel Tank快速濕式轉(zhuǎn)印槽
1.1 簡介Fast Wet Transfer Gel Tank
可同時容納兩個轉(zhuǎn)移電泳夾套,可以被用于聚丙烯酰胺凝膠中的蛋白質(zhì)樣品的轉(zhuǎn)印。冷卻模塊是 Fast Wet Transfer Gel Tank
的標(biāo)準(zhǔn)配置,經(jīng)冷凍后可以吸收在快速轉(zhuǎn)移電泳中產(chǎn)生的熱量。使用內(nèi)置的冷卻裝置可免除使用昂 貴的外部冷卻循環(huán)水浴設(shè)備,同時免去管路連接的麻煩。Fast Wet Transfer Gel Tank 的其他特點包括:1.
新型轉(zhuǎn)印夾上簡單易用的閉鎖裝置、顏色標(biāo)記的凝膠夾套以及電泳芯便于在轉(zhuǎn)移電泳時的準(zhǔn)確定向、特殊設(shè)計的插入和拔出裝置使操作更 加有效。2.
專利設(shè)計的新型轉(zhuǎn)印夾可以保證液體流在轉(zhuǎn)印時浸潤海綿沒有死角,可以保證轉(zhuǎn)印的效率。3.
配套使用的 Fast Transfer Buffer(20X)
可以讓轉(zhuǎn)印更高效,迅速。這些特點都是為了確保使 Fast Wet Transfer Gel Tank
成為一款簡便易用、具有完美轉(zhuǎn)印效果的轉(zhuǎn)移電泳系統(tǒng)。2.1 Fast Wet Transfer Gel Tank 轉(zhuǎn)印槽與配件(如圖一所示)2.2 轉(zhuǎn)印準(zhǔn)備將冷卻冰盒放入 -20°C
冰箱中冷凍備用,使用后再放回冰箱中冷凍儲存。1
. 準(zhǔn)備轉(zhuǎn)移緩沖液(推薦 Fast Transfer Buffer(20X)
說明書)(如圖二所示)2
.按照凝膠的大小剪切濾紙和膜, 注意在操作膜時一定要戴手套以避免污染。平衡凝膠, 在轉(zhuǎn)移緩沖液中浸泡膜、濾紙和轉(zhuǎn)移襯墊(15
min-1
h,取決于凝膠厚度)3
. 制備凝膠三明治夾 : 將新型轉(zhuǎn)印夾的黑色向下放置在干凈的托盤上。放置一個預(yù)濕潤的轉(zhuǎn)移襯墊在夾套的黑色部分上。在轉(zhuǎn)移襯墊上放置 浸濕過的濾紙。把平衡后的凝膠放在濾紙上。(排出凝膠與濾紙之間的氣泡) 將浸泡過的膜放在凝膠上。(排出膜與凝膠之間的氣泡) 放置濾紙 在膜上并排出所有氣泡,然后加上轉(zhuǎn)移襯墊。(如圖三所示)
注意: 請將氣泡完全排出以得到最佳的轉(zhuǎn)移效果,可使用玻璃棒輕輕滾動將氣泡趕出。 4
. 夾緊夾套,小心不要移動凝膠和濾紙三明治,用白色滑塊鎖住夾套。5
. 將凝膠三明治夾插入轉(zhuǎn)印內(nèi)芯中,重復(fù)上述步驟制備另一個凝膠三明治夾。(如圖四所示)6
.放入緩沖液槽中加入冷凍的冷卻冰盒,用緩沖液充滿。(如圖五所示)7
. 蓋上轉(zhuǎn)印槽安全蓋, 將電源線纜插入電源開始轉(zhuǎn)印, 請確保此步電源正負(fù)極連接正確。(緩沖液的電壓設(shè)定和轉(zhuǎn)印時間參見 Fast Transfer Buffer(20X)
說明書)(如圖六所示)8
. 電泳結(jié)束后,分解三明治夾,將膜取出繼續(xù)下一步操作。以實驗室用中性洗滌劑清洗轉(zhuǎn)印槽、夾套、襯墊等,再以去離子水沖洗干凈。

2.3 酸性轉(zhuǎn)移酸性轉(zhuǎn)移是為蛋白等電點在堿性范圍(pH10
附近) 的蛋白進行的轉(zhuǎn)移,本說明書不對此做過多說明只指明操作方式,請自行設(shè)計轉(zhuǎn)印條件。 酸性轉(zhuǎn)移是在酸性條件下進行,請交換凝膠與膜的位置,將膜放在凝膠的負(fù)極一端。在酸性條件下,蛋白質(zhì)將向相反方向轉(zhuǎn)移—
向負(fù)電極方向泳動。不要反轉(zhuǎn)電極本身,否則將損壞電泳槽。3.1 轉(zhuǎn)移緩沖液和運行條件的常規(guī)指南本轉(zhuǎn)印槽建議使用配套的 Fast Transfer Buffer(20X)(
貨號: F00002Gel)
,使用條件請參照 Fast Transfer Buffer(20X)
使用說明書。如果有使 用其他形式轉(zhuǎn)印液,請自行設(shè)定轉(zhuǎn)印條件。
4.1 蛋白印記膜
硝酸纖維素膜
硝酸纖維素膜被廣泛用于蛋白的結(jié)合與檢測。它的總蛋白檢測可以簡單地用蛋白染料(如:氨基黑、考馬斯蘭、麗春紅 S、固綠 FCF 等) 或更 加靈敏的膠體金染料染色, 并可以進行放射性免疫分析(RIA)、熒光免疫分析(FIA)和酶聯(lián)免疫分析(EIA)。硝酸纖維素膜具有 80-100 μg/cm2 的較高結(jié)合容量, 不需預(yù)處理, 非特異性蛋白結(jié)合位點容易被封閉, 避免了背景問題的出現(xiàn)。低分子量蛋白(分子量 <20 KD)容易在轉(zhuǎn)移后的 沖洗中丟失, 造成檢測靈敏度降低。更小孔徑的硝酸纖維素膜(0.2 μm)可以消除這一現(xiàn)象。被 SDS 變性的大分量蛋白(>100 KD)由于轉(zhuǎn)移緩 沖液中甲醇的存在將會難于被轉(zhuǎn)移。甲醇可以增強 SDS 蛋白與硝酸纖維素的結(jié)合,但同時也會收縮凝膠的孔徑。從 SDS 蛋白轉(zhuǎn)移中去除甲 醇會造成結(jié)合的明顯減少。在轉(zhuǎn)移緩沖液中增加 SDS(至 0.1%)會使蛋白的轉(zhuǎn)移效率增加, 但結(jié)合量減少。SDS 同樣會使緩沖液的電導(dǎo)增強, 在轉(zhuǎn)移中產(chǎn)生較多的熱。
PVDF 膜
PVDF(聚偏二乙烯二氟) 膜是理想的氨基末端測序、氨基酸分析和印跡蛋白免疫測定的支撐。PVDF 能在極端條件下, 如暴露在酸、堿環(huán)境, 或 在有機溶劑中, 保留蛋白質(zhì)。在測序操作中, 強大的保持力以增強的初始結(jié)合以及高重復(fù)性的收益, 提高了得到珍惜的低豐度蛋白信息的可能
性。另外, 在含有 SDS 的轉(zhuǎn)移緩沖液中, PVDF 膜展現(xiàn)了更佳的結(jié)合效率。PVDF 膜必須在使用前以 100% 甲醇浸濕, 然后用于不含甲醇的緩沖液。